明膠酶譜法檢測(cè)試劑盒正確條帶掃描方法

基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)以無(wú)活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細(xì)胞外基質(zhì)，膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程，其在臨床診斷和治療中的意義日益受到重視。

產(chǎn)品名稱：明膠酶譜法檢測(cè)試劑盒（MMP2/9)

產(chǎn)品規(guī)格：50T

儲(chǔ)存條件：按說(shuō)明書分別于4℃和-20℃儲(chǔ)存

檢測(cè)原理：

本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測(cè)MMP-2、MMP-9活性。Zymography是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法，其靈敏度可達(dá)1nM，高于ELISA方法，其基本原理1和程序是：制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳，電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，從而能同時(shí)指示MMP-2、MMP-9的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測(cè)少至0.1~0.5μl血液中的MMP-2、MMP-9酶譜及活性，檢測(cè)靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè)，如果小膠加樣孔為10~15個(gè)，則總計(jì)可檢測(cè)500~750個(gè)樣品。

MMP透明條帶的大小、位置和酶譜的圖例。注意因?yàn)闃悠肺催€原和加熱變性，條帶位置并不對(duì)應(yīng)推算的蛋白分子量。下圖1，正常血漿樣品陽(yáng)性對(duì)照可能出現(xiàn)的反相顯示的透明條帶位置：66kDa(MMP-2)，72kDa(proMMP-2)，87kDa(MMP-9)，92kDa(proMMP-9)，注意血漿中只有很少量的激活狀態(tài)的66kDa的MMP2，增加上樣量在ProMMP2下面隱約可見(最右側(cè)泳道)。

條帶掃描：將凝膠放在掃描儀上掃描。雖然MMP條帶透明，但凝膠背景并非真正全黑。解決辦法：可用非透射光掃描，或用軟件圖像處理程序調(diào)整背景顯示為灰度顯示，并盡量設(shè)置為黑色。MMP 條帶則為白色，這種背景黑條帶白的格式是英文論文中最常見的格式。